第八百七十五章 蒲地蓝消炎口服液（1）(2/2)

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也就是对照组、模型组、拜阿司匹林组(200毫克/千克)、蒲地蓝消炎口服液低剂量组(13毫升/千克)、蒲地蓝消炎口服液中剂量组(39毫升/千克)、蒲地蓝消炎口服液高剂量组(117毫升/千克)。

拜阿司匹林组和蒲地蓝消炎口服液各剂量组给予相应剂量药物，每日1次，连续5d，空白组和模型组灌胃等体积的生理盐水。

末次给药1小时后，除空白组外，其余各组构建急性肺炎模型。

即使用异氟烷麻醉小鼠后，用脂多糖(2毫克/千克)给小鼠滴鼻造模，空白组滴入相同体积生理盐水，造模12小时后进行取材。

各组小鼠摘眼球取血，解剖并取左肺中叶用百分之10甲醛溶液固定，石蜡包埋后进行小时e染色，分装部分血清用于检测il-10、tnf-α和nf-kb的含量，剩余血清置于-80摄氏度保存，进行后续代谢组学检测。”

钟医喘了一口气，继续说道。

“其次，是溶液的配制。

精密称取丙酮酸、乳酸、琥珀酸、富马酸、苹果酸、α-酮戊二酸、磷酸烯醇式丙酮酸、顺式乌头酸、3-磷酸甘油酸、柠檬酸、异柠檬酸和葡萄糖对照品，溶解成1毫克/毫升的对照品储备液。

精密量取上述对照品储备液分别稀释成4、120、16、01、05、1、002、001、004、25、016、240微克/毫升的对照品溶液，4摄氏度保存。

精密称取1，肉豆蔻酸适量置于10毫升容量瓶中，加甲醇稀释溶解，配制成1毫克/毫升的内标储备液，4摄氏度保存。

吸取内标储备液适量，加入甲醇稀释成浓度为5微克/毫升的内标工作液。

然后是样本前处理及衍生化反应。

取50微升血清，加入200微升预冷的含1，2-13c2-肉豆蔻酸(5微克/毫升)的甲醇溶液，涡旋3分钟，4摄氏度离心10分钟(14000r/分钟)。

同时，取上清液100微升置30摄氏度真空浓缩仪挥干2小时，加10毫克/毫升甲氧胺吡啶30微升，涡旋5分钟，30摄氏度振荡15小时。

继续加入30微升bstfa，涡旋5分钟，37摄氏度振荡半小时，最后将样品4摄氏度离心10分钟，14000r/分钟，取上清进样。

最后，分析条件色谱条件:载气为氦气，流速12毫升/分钟，采用分流进样，分流流速为240毫升/分钟，分流比为20∶1。

色谱柱:tg-5ms30mx025mmx025μm，进样口温度300摄氏度。

升温程序:60摄氏度保持1分钟，以20摄氏度/分钟升至320摄氏度，保持5分钟。

质谱条件:ei电离源，电子能量为70ev，离子源温度为300摄氏度，传输线温度为300摄氏度。溶剂峰延迟时间为38分钟。

采用全扫描模式，扫描范围m/z50~500。

各代谢物靶向定量测定采用选择反应监测(srm)模式，碰撞气为高纯氩气(99999)。

质谱参数优化吸取一定量的各代谢物的储备液和内标储备液进行混合，用甲醇稀释并挥干，采用衍生化条件进行衍生化并进样，采用全扫模式，对代谢物进行测定，确定各代谢物及内标的出峰时间。

然后，我们再采用tsq8000的autosrm分析模式自动优化质谱仪分析参数，优化后的各物质参数是……”

“是什么？”杨光好奇又迫切地问道。